|
|
Magnetické částice jako reverzibilní nosič pro enzymové elektrody
Janíček, Zdeněk ; Žeravík,, Jiří (oponent) ; Skládal,, Petr (vedoucí práce)
Diplomová práce obsahuje informace o používaných enzymech, biosenzorech, enzymových biosenzorech a magnetických částicích. Cholinesterasa (ChE) je obecné označení pro dva příbuzné enzymy, vzájemně se lišící výskytem a biologickou funkcí. Acetylcholinesterasa (AChE) je nezbytná při přenosu nervového vzruchu. Nachází se na cholinergních synapsích, kde působí hydrolýzu neurotransmiteru acetylcholinu a tím i terminaci nervového vzruchu. Příbuzná je butyrylcholinesterasa (BChE) přítomná v séru. Experimentální část byla zaměřena na elektrochemické enzymové biosenzory s cholinesterasou využívající magnetické částice pro reversibilní obnovu biorekogniční vrstvy. Imobilizace cholinesterasy na magnetické částice byla provedena kovalentní vazbou po aktivaci glutaraldehydem. Měření aktivity probíhalo s acetylthiocholinem jako substrátem v průtočném systému, magnetické částice byly zachyceny před platinovou elektrodou a produkovaný thiocholin se detekoval amperometricky. Cílem bylo měřit inhibici AChE. Významná je inhibice ChE způsobovaná některými léky a pesticidy na bázi organofosfátů. Zde byla testována inhibice AChE pesticidem dichlorvosem. Důraz byl kladen na nalezení vhodných experimentálních podmínek pro vytvoření automatizovaného postupu k měření aktivity AChE, který byl založen na autoinjektoru a pumpách firmy Gilson spolu s programem 735 pro definici pracovní konfigurace, přípravu měřících skriptů a provádění aplikačních metod.
|
|
|
Electrochemical biosensors with spatially separated enzymatic and detection parts for selective analysis in flow-through arrangement
Tvorynska, Sofiia ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Labuda, Ján (oponent) ; Korecká, Lucie (oponent)
Předpokládaná disertační práce pojednává o čtyřech nově vyvinutých, opakovaně použitelných, stabilních a zároveň jednoduchých a cenově výhodných elektrochemických (bi)enzymatických biosenzorech pro selektivní a spolehlivé stanovení cholinu, acetylcholinu, močové kyseliny a L-mléčné kyseliny. Všechny biosenzory jsou založeny na koncepci prostorového oddělení biorozpoznávací části od detekční a amperometrického monitorování enzymaticky spotřebovaného kyslíku prostřednictvím jeho čtyřelektronové redukce při vysoce záporném detekčním potenciálu. Konstrukce biosenzorů zahrnuje snadno vyměnitelný enzymatický/é mini-reaktor(y) připojený/é před průtokovou celou, která obsahuje příslušný převodník na bázi pevného stříbrného amalgámu. Enzymatické mini-reaktory založené na cholin oxidase, urikase nebo laktát oxidase byly použity pro biosenzory na cholin, močovou kyselinu nebo L-mléčnou kyselinu. Bienzymatický biosenzor na acetylcholin zahrnuje sériově propojené mini-reaktory na bázi acetylcholinesterasy a cholin oxidasy. První část této práce se zaměřuje na konstrukci dvou různých elektrod na bázi stříbrného amalgámu. Konkrétně tato část pojednává o výrobě stříbrné pevné amalgámové elektrody pokryté rtuťovým filmem pro wall-jet průtokovou celu a navíc, zdůrazňuje rozdíly mezi jejím využitím jako...
|
|
|
Alkaloidy Papaver rhoeas L. (Papaveraceae) a jejich biologická aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě VI.
Ludvik, Matěj ; Chlebek, Jakub (vedoucí práce) ; Šafratová, Marcela (oponent)
Ludvik M., Alkaloidy Papaver rhoeas L. (Papaveraceae) a jejich aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě VI., Diplomová práce, Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmakognozie a farmaceutické botaniky, Hradec Králové 2023, počet stran 69. Tato diplomová práce se zabývá izolací alkaloidů ze spojené frakce 13-15 diethyletherového výtřepku z Papaver rhoeas L. Pro izolaci alkaloidů byly použity metody flash chromatografie a preparativní tenkovrstvé chromatografie. Struktura získaných sloučenin byla určena za pomoci spektrometrických a spektrofotometrických metod (GC-MS, NMR a optická otáčivost). Díky těmto metodám byly sloučeniny identifikovány jako galanthamin a N,N-dimethyltryptamin. N,N-dimethyltryptamin byl poté podroben testům na zjištění jeho biologické aktivity vůči lidským cholinesterasám, konkrétně acetylcholinesterase a butyrylcholinesterase. Galanthamin v tomto kontextu testován nebyl, jelikož už byl na Katedře farmakognozie a farmaceutické botaniky dříve testován. N,N-dimethyltryptamin vykazoval mírnou inhibiční aktivitu vůči BuChE (IC50 = 44,14 ± 1,76) a vůči AChE se ukázal jako neúčinný (IC50 = > 100). Ačkoliv se ukázal jako mírný inhibitor BuChE, nemůže být v terapii využit z důvodu jeho toxicity. Galanthamin je silným inhibitorem AChE (IC50 = 1,72 ± 0,12)...
|
|
|
Alkaloidy Papaver rhoeas L. (Papaveraceae) a jejich biologická aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě V.
Dušánková, Zita ; Chlebek, Jakub (vedoucí práce) ; Hošťálková, Anna (oponent)
Dušánková, Z.: Alkaloidy Papaver rhoeas L. (Papaveraceae) a jejich biologická aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě V.; Diplomová práce, Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmakognozie a farmaceutické botaniky, Hradec Králové 2023, počet stran 72. Tato diplomová práce se věnuje izolaci alkaloidů ze spojené frakce 7-8 diethyletherového (Et2O) výtřepku Papaver rhoeas L. (Papaveraceae). Pro izolaci alkaloidů byla využita kombinace sloupcové chromatografie (flash chromatografie), chromatografie v plošném uspořádání (preparativní TLC) a krystalizace. Struktura izolovaných sloučenin byla určena pomocí metod NMR, GC-MS a optické otáčivosti, díky kterým byly sloučeniny identifikovány jako ZD-1, (+)-3,4-dehydrotheaspiron, (±)-juziphin, (+)-lirinidin a protopin. Alkaloidy byly podrobeny testování na biologickou aktivitu vůči enzymům (acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase, popř. prolyloligopeptidase). (+)-3,4-Dehydrotheaspiron, (±)-juziphin ani protopin nevykazovaly k žádnému z enzymů významnou inhibiční aktivitu (IC50 AChE >100 µM, IC50 BuChE >100 µM), protopin byl vůči prolyloligopeptidase také neaktivní (IC50 POP >1000 µM). (+)-Lirinidin vykazoval střední inhibiční aktivitu vůči BuChE (23,45 ± 0,55 µM), vůči AChE je neaktivní (IC50 AChE >100 µM). Klíčová slova:...
|
|
|
Syntéza a hodnocení duálně působících potenciálních léčiv neurodegenerativních chorob
Miffek, Dominik ; Krátký, Martin (vedoucí práce) ; Vinšová, Jarmila (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra organické a bioorganické chemie Autor práce: Dominik Miffek Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Mgr. Martin Krátký, Ph.D. Název diplomové práce: Syntéza a hodnocení duálně působících potenciálních léčiv neurodegenerativních chorob Alzheimerova (AD) a Parkinsonova choroba (PD) jsou neurodegenerativní onemocnění, postihující zejména populaci vyššího věku. Incidence těchto onemocnění stále roste po celém světě a ani jedna z těchto nemocí nemá v současné době léčbu, která by byla schopná pacienty trvale vyléčit. Dosavadní léčiva cílí převážně na zpomalení progrese těchto onemocnění. Cílem je u těchto neurodegenerativních onemocnění zlepšit dostupnost léčby, zamezit progresi nebo úplně vyléčit pacienty trpící AD a PD. Tímto směrem se i vyvíjí nová potencionální léčiva, která by mohla vykazovat uspokojivý účinek v inhibici cholinesteráz. Acetylcholinesteráza (ACh) a butyrylcholinesteráza (BuChE) hrají totiž významnou roli v patogenezi těchto onemocnění. Zejména u AD dochází k poklesu acetylcholinu coby neuromediátoru zajišťujícího homeostázu a správný chod centrální nervové soustavy (CNS). V léčbě AD se používají inhibitory (AChE), které zvyšují hladinu acetylcholinu (ACh) v mozku. Mezi využívané zástupce patří, rivastigmin,...
|
|
|
Alkaloidy Vinca minor L. a jejich biologická aktivita (inhibice lidských cholinesteras) V.
Vašíčková, Alžběta ; Chlebek, Jakub (vedoucí práce) ; Hošťálková, Anna (oponent)
Vašíčková A.: Alkaloidy Vinca minor L. a jejich biologická aktivita (inhibice lidských cholinesteras) V. Diplomová práce, Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické botaniky, Hradec Králové 2020. Z vybrané frakce VM 215-258 byly izolovány flash chromatografií a následnou preparativní TLC nebo krystalizací 3 alkaloidy. Jejich struktura byla určena na základě hmotnostní spektroskopie, NMR a optické otáčivosti a data byla porovnána s literaturou. Striktamin a minovincinin patří mezi alkaloidy již dříve izolované, alkaloid AV-3 je nově izolovaná sloučenina. Tyto čisté alkaloidy byly testovány na schopnost inhibovat lidské cholinesterasy a jejich inhibiční aktivita byla porovnána se standardy galanthaminem a fysostigminem. Sloučenina AV-3 vykazovala mírnou inhibiční aktivitu vůči BChE (IC50 μM > 86,3 ± 2,3), jinak se jedná o neaktivní sloučeniny, jejich IC50 vůči cholinesterasám byla > než 100 μM. Klíčová slova: Vinca minor L., vinca alkaloidy, minonovincinin, striktamin, Alzheimerova demence, acetylcholinesterasa, butyrylcholinesterasa.
|
|
|
Alkaloidy Vinca minor L. a jejich biologická aktivita III.
Valová, Dominika ; Chlebek, Jakub (vedoucí práce) ; Hradiská Breiterová, Kateřina (oponent)
Valová, D.: Alkaloidy Vinca minor L. a jejich biologická aktivita III. Diplomová práce, Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické botaniky, Hradec Králové 2020, 75 s. Alzheimerova choroba (AD) je progresivní neurodegenerativní onemocnění a je nejčastější formou demence. Vzhledem k tomu, že tuto chorobu zatím nelze kauzálně léčit, je důležitý výzkum nových látek. Tato práce se zaměřila na izolaci alkaloidů z extraktu Vinca minor L. jako potenciálního léčiva. Příprava a sloupcová chromatografie sumárního extraktu byla provedena Ing. Miroslavem Ločárkem v rámci jeho doktorského studia. Následná preparativní TLC vedla k izolaci tří sloučenin. Chemické struktury izolovaných alkaloidů byly objasněny optickou otáčivostí, NMR a MS analýzou a porovnáním získaných dat s údaji v literatuře. Jedna ze sloučenin byla stanovena jako (-)-vincin, zbylé 2 sloučeniny jsou nové (nebyly dosud izolované). Tyto sloučeniny byly také testovány na jejich biologickou aktivitu. Vincin, DV-1 a DV-3 byly testovány na schopnost inhibovat acetylcholinesterasu (AChE) a butyrylcholinesterasu (BuChE). Dále byla také testována inhibiční aktivita vincinu a DV-3 vůči prolyl oligopeptidase (POP) a glykogensyntase kinase 3β (GSK-3β). Všechny izolované alkaloidy byly téměř neaktivní vůči AChE a...
|
|
|
Alkaloidy Centaurea cyanus L. (Asteraceae) a jejich biologická aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě
Drabbová, Adriana ; Chlebek, Jakub (vedoucí práce) ; Opletal, Lubomír (oponent)
Drabbová, A.: Alkaloidy Centaurea cyanus L. (Asteraceae) a jejich biologická aktivita vztažená k Alzheimerově chorobě. Diplomová práce, Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické botaniky, Hradec Králové 2020 Z nažek Centaurea cyanus L. byly připraveny ethyl-acetátové a chloroformové alkaloidní extrakty. Z ethyl-acetátového alkaloidního výtřepku byl běžnými chromatografickými metodami (sloupcovou chromatogarfií a preparativní TLC) izolován úplně nový alkaloid AD-1 (Adrabbin). Identifikace alkaloidu byla provedena hmotnostní spektrometrií, NMR analýzou a optickou otáčivostí. Sloučenina AD-1 (Adrabbin) má unikátní indolovou cyklickou strukturu. V rámci diplomové práce byla provedena i LC-MS analýza frakcí získaných flash chromatografií. V těchto frakcích, pozitivně reagujících s Dragendorffovým činidlem, byly detekovány látky odpovídající molekulovým hmotnostem alkaloidů dříve izolovaných z nažek některých druhů rodu Centaurea L. Alkaloid AD-1 (Adrabbin) byl testován na inhibici lidských cholinesteras a prolyloligopeptidasy. Vůči lidským cholinesterasám je látka považována za neaktivní (IC50 > 100 µM), prolyloligopeptidasu alkaloid AD-1 (Adrabbin) inhiboval srovnatelným způsobem jako známý inhibitor berberin (AD-1: IC50 143,0 ± 6,0 µM; berberin: IC50 142,0 ±...
|
|
|
Amaryllidaceae alkaloids of montanine type and their derivatives as potential drugs.
Maafi, Negar ; Cahlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Šmejkal, Karel (oponent) ; Havlík, Jaroslav (oponent)
Karlova Univerzita v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakognózie a farmaceutické botaniky Kandidát: Negar Maafi Školitel: Prof. Ing. Lucie Cahlíková, PhD. Název disertační práce: Amaryllidaceae alkaloidy montaninového typu a jejich deriváty jako potenciální léčiva. Na základě znalostí o biologické aktivitě alkaloidů montaninového typu Amaryllidaceae byly tyto alkaloidy vybrány pro přípravu jejich polosyntetických derivátů za účelem studia vztahu struktura vs. aktivita. Deriváty alkaloidů montaninového typu byly připraveny za využití haemanthaminu a montaninu jako výchozích látek. Montaninový alkaloid 3-O-methylpankracin byl připraven za využití intramolekulárního přesmyku z haemanthaminu. Montanin byl pro přípravu polosyntetických derivátů izolován z cibulí Hippeastrum x hybridum cv. Ferrari. Celkem bylo připraveno více než 80 alifatických a aromatických derivátů montaninu a 3-O-methylpankracinu. Všechny sloučeniny byly identifikovány za využití 1D- a 2D-NMR, MS, HRMS apod. Připravené deriváty byly screeningově testovány na celou řadu biologických aktivit (např. inhibiční potenciál vůči hAChE/hBuChE, antimykobakteriální, antibakteriální a antifugální aktivita, cytotoxicita a další). V rámci hAChE/hBuChE studie zajímavou selektivní hAChE inhibiční aktivitou disponoval derivát...
|
|
|
Amaryllidaceae alkaloidy jako předlohové struktury pro vývoj nových potenciálních léčiv
Knápková, Soňa ; Suchánková, Daniela (vedoucí práce) ; Cahlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakognozie Kandidát: Soňa Knápková Školitel: PharmDr. Daniela Hulcová, Ph.D. Název diplomové práce: Amaryllidaceae alkaloidy jako předlohové struktury pro vývoj nových potenciálních léčiv Čeleď Amaryllidaceae zahrnuje velké množství rodů kvetoucích rostlin jako Hippeastrum, Narcissus nebo Zephyrantes. Všechny obsahují specifické alkaloidy Amaryllidaceae, které jsou pro tuto čeleď charakteristické svými chemickými strukturami. Objev a studium těchto alkaloidů upoutalo pozornost mnoha vědců kvůli rozmanité biologické aktivitě těchto sloučenin, jako je například cytotoxický, anticholinesterasový, antibakteriální a antivirový efekt. Rostliny rodu Hippeastrum se v tradiční medicíně používají k léčbě nádorů a zánětlivých poruch. Toto použití lze vysvětlit alkaloidy, které obsahuje. Je to hlavně lykorin, haemanthamin a pankristatin. Tyto sloučeniny mají protinádorový účinek. Druh Hippeastrum cv. Ferrari je dále bohatý na alkaloid vittatin. V některých výzkumech jednoduché polosyntetické deriváty haemanthaminu vykazovaly slibné inhibiční aktivity proti cholinesterasam. Z tohoto důvodu byl jako další hlavní struktura pro přípravu semisyntetických derivátů zvolen vittatin. Sedm nových derivátů bylo připraveno esterifikací alkaloidu...
|
host ::
RSS.